牛蒡子苷对高糖诱导的视网膜神经节细胞凋亡和氧化损伤的影响

作者：冯万国^*; 徐昕涌; 许慧

来源：中国中医眼科杂志, 2021, 31(07): 466-472.

DOI：10.13444/j.cnki.zgzyykzz.2021.07.002

• 视网膜神经节细胞
• Toll样受体4
• 牛蒡子苷
• 高糖
• 凋亡

目的研究牛蒡子苷对高糖诱导的视网膜神经节细胞(RGCs)凋亡和氧化损伤的影响和机制。方法 RGCs分成对照组、高糖组、牛蒡子苷低剂量组(ARC-Ⅰ组)、中剂量组(ARC-Ⅱ组)、高剂量组(ARC-Ⅲ组),其中高糖组、ARC-Ⅰ组、ARC-Ⅱ组、ARC-Ⅲ组细胞在培养时分别添加50 mmol/L的葡萄糖,ARC-Ⅰ组、ARC-Ⅱ组、ARC-Ⅲ组依次添加牛蒡子苷浓度为0.2 mg/mL、0.4 mg/mL、0.8 mg/mL。MTT检测增殖活性,流式细胞术测定细胞凋亡,试剂盒检测caspase-3活性以及ROS、MDA、SOD水平,Western blot检测TLR4蛋白表达。在RGCs中转染TLR4过表达载体,用高糖和牛蒡子苷细胞培养液培养,检测细胞增殖、凋亡、caspase-3活性以及ROS、MDA、SOD水平。结果 (1)增殖率:与对照组比较,各组均明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与高糖组比较,各组均明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。ARC各剂量组随浓度增加而增殖率升高,差异均具有统计学意义(P<0.05)。(2)凋亡率:与对照组比较,各组均明显升高,差异均具有统计学意义(P<0.05)。与高糖组比较,各组均明显降低,差异均具有统计学意义(P<0.05)。ARC各剂量组随浓度增加而凋亡率降低,差异均具有统计学意义(P<0.05)。(3)caspase-3蛋白表达:与对照组比较,各组均明显升高,差异均具有统计学意义(P<0.05)。与高糖组比较,各组均明显降低,差异均具有统计学意义(P<0.05)。ARC各剂量组随浓度增加而caspase-3蛋白表达降低,差异均具有统计学意义(P<0.05)。(4)ROS、MDA、SOD水平:与对照组比较,各组ROS、MDA水平均明显升高,SOD水平均明显下降,差异均具有统计学意义(P<0.05)。与高糖组比较,各组ROS、MDA水平均明显降低,SOD水平均明显升高,差异均具有统计学意义(P<0.05)。ARC各剂量组随浓度增加而ROS、MDA水平降低,SOD水平升高,差异均具有统计学意义(P<0.05)。(5)TLR4蛋白表达:与对照组比较,各组均明显升高,差异均具有统计学意义(P<0.05)。与高糖组比较,各组均明显降低,差异均具有统计学意义(P<0.05)。ARC各剂量组随浓度增加而TLR4蛋白表达降低,差异均具有统计学意义(P<0.05)。(6)TLR4过表达:在RGCs中转染TLR4过表达载体,经过高糖和牛蒡子苷处理后,差异均具有统计学意义(t=9.391,P=0.001)。(7)TLR4过表达下的RGCs增殖率、凋亡率以及ROS水平:在RGCs中转染TLR4过表达载体和空载体(NC)阴性对照,经过高糖和牛蒡子苷处理后,ARC-Ⅱ+NC与ARC-Ⅱ+TLR4比较,细胞增殖率(t=7.639,P=0.000),凋亡率(t=7.129,P=0.000)和caspase-3活性(t=8.231,P=0.000),ROS(t=13.891,P=0.000)和MDA(t=8.406,P=0.000),SOD(t=9.966,P=0.000),差异均具有统计学意义。结论牛蒡子苷可通过下调TLR4蛋白表达抑制高糖诱导的RGCs凋亡和氧化损伤。

• 单位
  爱尔眼科医院