重组轮状病毒VP7抗原在粟酒裂殖酵母中的表达及免疫保护效果的评价

作者：王红涛; 宫汝淳; 王子宁; 王欣; 王美婷; 肖智

来源：沈阳药科大学学报, 2022, 1-8.

DOI：10.14066/j.cnki.cn21-1349/r.2022.0530

• 轮状病毒
• VP7抗原
• 粟酒裂殖酵母
• 免疫保护

目的为构建更为合适的真核生物基因的表达系统，进一步提高VP7免疫蛋白表达量。方法本研究利用高效真核粟酒裂殖酵母生物反应器表达轮状病毒VP7蛋白，同时鉴定评价其免疫保护效果。首先对病料核酸提取，反转录cDNA为模板，应用RT-PCR技术扩增VP7基因，并构建表达载体pESP-2-VP7，转染进入粟酒裂酵母。经过1%IPTG诱导VP7表达，分离纯化获得VP7蛋白，将VP7蛋白以不同免疫方式免疫小鼠评价其免疫保护效果。结果从分离的轮状病毒中扩增VP7基因与GeneBank中已发表的VP7全序列（NC＿007571.1）同源性比对达95%，VP7基因长度为1050bp，初步认为克隆结果正确，SDS-PAGE以及WesternBlot鉴定结果表明VP7蛋白大小为63kDa；VP7蛋白免疫小鼠后，其IgG、sIgA和中和抗体结果显示，50μg/只滴鼻免疫效果优于20μg/只滴鼻和注射组（50、20μg/只），且滴鼻免疫具有较高的攻毒保护率为100%。结论本研究对轮状病毒VP7基因真核表达以及VP7蛋白免疫保护效果做了进一步评价，为后续轮状病毒研究提供了理论依据。

• 单位
  通化师范学院