M2型抗线粒体抗体的靶抗原三联体克隆表达技术改良

作者：张婕婕; 杨自华

来源：国际检验医学杂志, 2018, 39(10): 1176-1179.

DOI：10.3969/j.issn.1673-4130.2018.10.006

• 抗线粒体抗体
• 肝硬化
• 自身免疫

目的改良构建M2型抗线粒体抗体(AMA-M2)靶基因三联体重组表达载体技术,建立检测AMA-M2的酶联免疫吸附法(ELISA)并进行评价。方法通过聚合酶链反应(PCR)扩增基因三联体BPO,构建表达载体pGEX-4T-1-BPO,转入大肠杆菌BL21表达,经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导得到重组蛋白,并通过亲和层析纯化得到目的蛋白,建立ELISA检测AMA-M2。结果获得纯度大于95%的重组蛋白;检测326例临床样本,43例原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者中有41例呈AMA-M2阳性,灵敏度为95.3%(41/43),特异度为98.2%(278/283),PBC组与非PBC组的AMA-M2检出率差异有统计学意义(P<0.05)。结论该改良技术获取的目的蛋白可以用于AMA-M2检测,AMA-M2对PBC的临床诊断具有较高的灵敏度和特异度。

• 单位
  深圳市人民医院