胸腺基质促淋巴细胞生成素介导PI3K/Akt通路抑制髓核细胞凋亡

作者：郑文凯; 黄智; 达逸峰; 邢文华; 李峰; 辛大奇; 刘胜祥; 杨学军; 祝勇^*

来源：中华骨科杂志, 2019, (06).

• 细胞培养技术
• 细胞凋亡
• 凋亡调节蛋白质类

目的 通过观察分析胸腺基质促淋巴细胞生成素(thymic stromal lymphopoietin,TSLP)作用于小鼠腰椎髓核细胞,明确胸腺基质促淋巴细胞生成素对小鼠髓核细胞生存活动的影响及机制。方法 从小鼠腰椎间盘分离获得髓核细胞,培养获得小鼠髓核细胞株,通过免疫荧光学染色鉴定细胞类型。实验组分为：①对照组,添加等量DMEM培养液；②TNF-α组(阳性对照组),加入500 ng/mL TNF-α诱导；③TSLP组,加入10 ng/mL TSLP诱导；④TSLP+LY94002组(阻断PI3K),加入10 ng/mL TSLP+10 μmol LY294002；⑤TSLP+Embelin组(阻断XIAP),加入10 ng/mL TSLP+ 50 μmol Embelin。均于恒温孵箱培养24 h,。蛋白免疫印迹分析细胞内Akt/PKB、XIAP、caspase-3的表达变化。流式细胞术检测观察小鼠髓核细胞凋亡率的变化。结果 荧光显微镜观察见所培养细胞Ⅱ型胶原蛋白染色阳性,证实所培养细胞为髓核细胞。蛋白表达及细胞凋亡率检测结果显示,与对照组相比,TSLP组小鼠髓核细胞内Akt磷酸化明显增强,差异有统计学意义(t=9.510,P=0.001),XIAP表达增加,差异有统计学意义(t=8.851,P=0.001),caspase-3变化不明显,小鼠髓核细胞凋亡率变化不明显。与TSLP组相比,TSLP+LY94002组的Akt磷酸化减弱(t=8.798,P=0.001),XIAP表达下降(t=7.032,P=0.002),caspase-3活化明显增强(t=5.908,P=0.004)。小鼠髓核细胞凋亡率明显升高,差异有统计学意义(t=21.268,P=0.001)。TSLP+Embelin组caspase-3活化明显增强(t=7.990,P=0.001)。小鼠髓核细胞凋亡率也明显升高(t=21.279,P=0.001)。结论 TSLP具有通过激活小鼠髓核细胞内PI3K/Akt通路上调XIAP的表达,抑制caspase-3的活化,最终抑制髓核细胞的凋亡的作用,其可通过激活PI3K/Akt通路抑制髓核细胞凋亡的作用。

• 单位
  内蒙古医科大学第二附属医院