鼠源性髓过氧化物酶特异性抗中性粒细胞胞质抗体的制备及鉴定

作者：安晓宁; 魏兆楠; 倪莉燕; 沈艳; 陈永熙^*

来源：现代免疫学, 2022, 42(03): 218-223.

• 髓过氧化物酶
• 抗中性粒细胞胞质抗体
• 血管炎

采用鼠源性髓过氧化物酶(myeloperoxidase, MPO)与弗氏佐剂混合注射的方式制备小鼠MPO特异性抗中性粒细胞胞质抗体(anti-neutrophil cytoplasmic antibody, ANCA),并予以定性及定量检测。使用B6.129X1-Mpotm1Lus/J小鼠(即MPO敲除小鼠),将mMPO与完全/不完全弗氏佐剂混合，通过腹腔注射方式诱导小鼠产生适应性免疫应答。采用定性ELISA以及间接免疫荧光法检测小鼠血清ANCA水平；采用肌酐检测试剂盒(肌氨酸氧化酶法)检测小鼠血清肌酐水平以评估其肾功能。ELISA检测结果显示，实验组小鼠血清MPO-ANCA的光密度D(450 nm)值较对照组显著升高(P<0.001),约为对照组的5.6倍；间接免疫荧光法结果提示，实验组中性粒细胞胞质有较强的荧光信号，与MPO-ANCA的核周型特点相一致；H-E染色示部分肾小球囊壁层上皮细胞过度增殖；实验组与对照组小鼠血清肌酐水平检测结果差异不显著(P>0.05)。由此，注射MPO与弗氏佐剂混合液诱导MPO-/-小鼠产生了抗MPO-ANCA,ELISA和细胞免疫荧光实验均验证了抗体的生成，可为进一步构建实验性血管炎小鼠模型提供重要基础。

• 单位
  上海交通大学医学院附属瑞金医院