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摘要
为探讨上调miR-140表达的胃癌间充质干细胞(gastric cancer mesenchymal stem cell, GC-MSC)对胃癌细胞免疫微环境中生存的影响并探讨其机制,以贴壁细胞培养法分别从胃癌组织及癌旁组织中分离GC-MSC及胃间充质干细胞(gastric mesenchymal stem cell, GMSC)。qRT-PCR检测GC-MSC及GMSC中miR-140的差异表达;通过miR-140模拟物(miR-140 mimics)上调GC-MSC中miR-140的表达,CCK8法及FACS检测GC-MSC诱导的HGC-27细胞生存及凋亡情况,ELISA检测miR-140 mimics转染GC-MSC干预HGC-27细胞诱导PBMC分泌炎性因子的变化;以qRT-PCR及Western blotting检测miR-140 mimics/GC-MSC干预下胃癌HGC-27细胞PD-L1及PD-1表达水平的变化;双荧光素酶报告基因实验验证miR-140与PD-L1直接靶向调控关系。结果显示,miR-140在GC-MSC中的表达量显著低于GMSC(P<0.001);上调miR-140(表达量提高至约9倍,转染效率>85%)后GC-MSC可显著抑制胃癌细胞的存活率,促进其凋亡(均P<0.05);上调miR-140表达能够使GC-MSC诱导的胃癌细胞在免疫微环境中的生存受到抑制(均P<0.05);上调GC-MSC中miR-140表达对胃癌细胞诱导下PBMC分泌细胞因子发挥促进作用(均P<0.05)。上调miR-140表达的GC-MSC能显著下调HGC-27细胞PD-L1及PD-1的表达(均P<0.001),且miR-140与PD-L1存在靶向互作关系(P<0.001)。由此,上调miR-140表达靶向抑制PD-L1逆转GC-MSC诱导的胃癌细胞生存促进及凋亡抵抗。
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单位丹东市第一医院; 锦州医科大学
