番茄细菌性斑点病菌实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

作者：柴阿丽; 帕提古丽; 郭威涛; 石延霞; 谢学文; 席先梅; 李宝聚^*

来源：园艺学报, 2019, 46(01): 182-192.

DOI：10.16420/j.issn.0513-353x.2018-0294

• 番茄
• 丁香假单胞菌番茄致病变种
• 实时荧光定量PCR
• 种子检测
• 组织检测

以番茄细菌性斑点病病原菌丁香假单胞菌番茄致病变种(Pseudomonas syringae pv. tomato,Pst)的致病相关基因HrpZ为靶序列,设计了特异性引物Pst3F/Pst3R,能从Pst基因组DNA中特异性扩增出大小为161 bp的目的片段。建立的Pst实时荧光定量PCR检测技术体系的检测灵敏度比普通PCR高1 000倍。利用实时荧光定量PCR检测体系,检测模拟带菌种子中Pst的带菌量,检测下限为4.21 cfu·g-1;检测人工接种叶片组织中Pst的带菌量,检测到1级发病叶片带菌量为4.15×102 cfu·g-1。对田间采集的63个番茄细菌性斑点病明显症状和疑似症状样本,分别进行了实时荧光定量PCR、普通PCR和病原菌分离检测,检测到54个样本中含有Pst,3种方法检测结果一致。结果表明,建立的Pst实时荧光定量PCR检测体系具有特异性强、灵敏度高的特点,可以快速准确地定量检测番茄种子和发病组织中Pst的含量,为番茄细菌性斑点病的早期预防和流行监测提供了有效的技术手段。

• 单位
  内蒙古自治区农牧业科学院; 中国农业科学院蔬菜花卉研究所; 新疆农业科学院; 植物保护研究所