宿主细胞残留DNA片段大小分布检测方法的建立及验证

作者：闫璐瑶; 张家友; 张青梅; 张哲罡; 夏志武; 邱冉; 刘京; 杨晓明^*

来源：中国生物制品学杂志, 2021, 34(03): 335-348.

DOI：10.13200/j.cnki.cjb.003298

• 宿主细胞残留DNA
• 片段大小
• 分布
• 毛细管电泳

目的建立宿主细胞残留DNA片段大小分布的检测方法,并进行验证,为监控疫苗生产过程提供依据。方法基于高灵敏的微型化芯片毛细管电泳法,用MDCK细胞基因组DNA作为阳性对照品,建立检测方法,并验证方法的检测范围、准确性及精密度。利用建立的方法分析MDCK细胞基质流感疫苗生产过程中间品(H1N1型流感病毒收获液、病毒微滤液、核酸酶处理收获液、浓缩病毒液、层析病毒液)残留DNA片段大小分布。结果 MDCK细胞基因组浓度为933.06 ng/μL,A260/280值为2.079,可作为阳性对照。该方法检测范围为35～10 380 bp,精密度检测CV均小于10%。用该方法检测H1N1型流感病毒疫苗中间品,结果显示宿主细胞基因组大片段被核酸酶处理成小片段,层析病毒液300 bp以下片段占总外源DNA的84%。结论建立了一种测定MDCK细胞基质流感疫苗宿主细胞残留DNA片段大小分布的检测方法,该方法精密度良好,有望用于连续细胞系衍生生物制品的原液检定和质量控制。

• 单位
  武汉生物制品研究所