一种适于家蚕细胞激素研究的双荧光素酶报告基因系统的内参质粒的构建（英文）

作者：刘红玲; 林英; 沈关望; 顾健健; 张海燕; 吴金鑫; 徐银莹; 龙威; 夏庆友^*

来源：生物工程学报, 2018, 34(10): 1631-1641.

DOI：10.13345/j.cjb.180007

• 家蚕
• 双荧光素酶报告基因系统
• 内参质粒
• 激素
• 方法

双荧光素酶报告基因系统能够提供灵敏的读数,但该系统需要依赖组成型表达的内参对读数进行归一化。然而,大多数内参并不是在所有条件下都组成型表达。为此,文中建立了一个有效的方法制备适于家蚕细胞双荧光素酶报告基因系统的内参质粒。首先,突变BmV gP78启动子上的激素应答相关元件,获得了在家蚕细胞中稳定表达的组成型启动子BmV gP78M;然后,用BmV gP78M替换pRL-SV40质粒上的SV40启动子和嵌合内含子序列,成功构建了pRL-V gP78M内参质粒;最后,通过细胞转染实验证实pRL-V gP78M内参在家蚕细胞系中稳定表达,并且pRL-V gP78M内参的表达活性不受蜕皮激素、保幼激素及激素相关转录因子的影响。最终,获得了在家蚕细胞中稳定表达且表达量适中的内参质粒pRL-V gP78M。该内参可以有效地作为双荧光素酶报告基因系统的内参质粒用于家蚕细胞系中激素的研究。同时,该内参质粒的构建方法也为构建适于其他物种细胞系的双荧光素酶报告基因系统的内参质粒提供了参考。

• 单位
  家蚕基因组生物学国家重点实验室; 西南大学