人源SIRT4蛋白在毕赤酵母中的表达及纯化

作者：朱红; 王春; 王芳; 邹叶芳; 陈晓雪; 刘亭; 李燕; 何彬^*

来源：郑州大学学报(医学版), 2018, 53(04): 443-447.

DOI：10.13705/j.issn.1671-6825.2017.11.130

• 人源SIRT4蛋白
• 巴斯德毕赤酵母
• 胞内表达

目的:获得表达量较高且有活性的人源SIRT4蛋白。方法:将SIRT4基因克隆到p PICZA载体上,得到重组p PICZA-SIRT4表达质粒。重组质粒线性化后转入到巴斯德毕赤酵母X33感受态细胞中,筛选出阳性菌株。将阳性重组菌株发酵培养,并对诱导剂甲醇浓度进行优化,表达蛋白用镍柱His TrapTMHP进行纯化,并对表达的蛋白进行活性考察。结果:SDS-PAGE显示表达的SIRT4目的蛋白大小约33 000,与预期蛋白相对分子质量大小相符,进一步利用His标签抗体通过Western blot确认了目标蛋白,并且初步验证了SIRT4的去生物素酰化和去硫辛酰化的活性。结论:成功用巴斯德毕赤酵母表达了有活性的SIRT4蛋白,并且获得酵母表达的最佳诱导条件。

• 单位
  贵州医科大学; 基础医学院