滇金丝猴粪便微生物来源的β-半乳糖苷酶基因的表达及酶学性质

作者：张文洪; 杨雁霞; 杨正凤; 黄遵锡; 李俊俊; 唐湘华; 杨云娟; 吴倩; 慕跃林; 韩楠玉; 许波^*

来源：微生物学报, 2019, 59(08): 1561-1575.

DOI：10.13343/j.cnki.wsxb.20180468

• 滇金丝猴
• 粪便微生物宏基因组
• β-半乳糖苷酶
• 耐盐性
• 转糖基

【目的】对滇金丝猴粪便微生物来源的β-半乳糖苷酶进行异源表达和纯化,并研究其酶学性质。【方法】从滇金丝猴粪便微生物的宏基因组中克隆出一个β-半乳糖苷酶基因galRBM201,对该基因进行异源表达和酶学性质分析。构建含有T7强启动子的pEASY-E2-galRBM201质粒,转化至大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达后进行酶学性质研究。【结果】滇金丝猴粪便来源的β-半乳糖苷酶(galRBM201)最适pH为5.0,在pH 4–7之间能保留70%及其以上的活性。最适温度为45°C,在37°C和45°C下耐受1 h,酶活不变。特别的是,该酶具有良好的Na Cl稳定性,经1–5 mol/L的Na Cl作用1 h后,相对酶活均能超过初始酶活:当NaCl的作用浓度为4 mol/L时,β-半乳糖苷酶相对酶活最高(146%);当NaCl的作用浓度为5mol/L时,β-半乳糖苷酶的相对酶活仍达到135%。【结论】本研究从滇金丝猴粪便微生物的宏基因库中克隆得到β-半乳糖苷酶基因galRBM201,并成功在大肠杆菌BL21(DE3)表达,首次从动物胃肠道宏基因组中获得具有耐盐和转糖基产Galactooligosaccharides(GOS)性能的β-半乳糖苷酶。该酶具有良好的耐盐性,和较广的pH作用范围,使其在食品、生物技术领域和环保方面的发展具有良好的应用价值。

• 单位
  生命科学学院; 云南师范大学