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摘要
旨在明确牛源坏死梭杆菌43K OMP的黏附特性。将43K OMP基因克隆连接至pET-32a载体，转化入大肠杆菌BL21 DE3中，通过IPTG诱导进行原核表达，应用黏附试验、天然蛋白竞争试验、抗体抑制试验和蛋白酶水解试验，明确牛源坏死梭杆菌43K OMP的黏附性，同时将纯化的重组蛋白和提取的天然43K OMP与牛子宫内膜细胞和牛乳腺上皮细胞共孵育，观察43K OMP对细胞的黏附作用。结果显示：43K OMP基因克隆到pET-32a载体中，随后在大肠杆菌BL21 DE3以包涵体形式成功表达；携带重组质粒(H2019)的大肠杆菌经IPTG诱导后，与空载体对照相比，与宿主细胞的结合显著增强(P<0.05);天然43K OMP与细胞共孵育后，黏附细胞的细菌数量显著降低(P<0.05);H2019与43K OMP多抗或单抗预孵育后，显著降低黏附宿主细胞的细菌数量(P<0.05);经不同浓度蛋白酶K处理H2019后，黏附细胞的细菌数量显著降低(P<0.05),且与蛋白酶K浓度呈现剂量依赖关系。同时，43K OMP天然蛋白和重组蛋白能黏附于牛子宫内膜细胞和乳腺上皮细胞表面。牛源坏死梭杆菌43K OMP能黏附宿主细胞，43K OMP作为一种黏附蛋白有助于牛源坏死梭杆菌对宿主细胞的黏附作用。
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