α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶在毕赤酵母中的表达及其对大麦麦芽过滤性能的影响

作者：解西柱; 张明; 林材; 蔡国林; 吴殿辉; 李晓敏; 陆健

来源：食品与发酵工业, 2018, 44(02): 48-54.

DOI：10.13995/j.cnki.11-1802/ts.015687

• α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶
• 克隆表达
• 麦芽
• 过滤性能
• 协同作用

PCR技术从黑曲霉(Aspergillus niger)基因组扩增获得1个全长1 790 bp的α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶基因,基因含有1个50 bp的内含子序列,其对应的蛋白质序列含有5个O糖基化位点和9个N糖基化位点,N端含有18个氨基酸的信号肽序列。将目的基因与表达载体pPICZαA连接并在毕赤酵母X-33诱导表达,获得重组α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶。重组酶的相对分子质量为70 kDa,最适反应pH和温度分别为pH 5.5和50℃;金属离子Cu2+、Zn2+和Fe2+对重组酶的酶活有抑制作用,Fe3+对重组酶的酶活有促进作用;以4-Nitrophenylα-L-arabinofuranoside为底物测得酶的Km值和Vmax值分别为0.78 mmol/L和2.57μmol/(min·mg)。在大麦麦芽协定糖化的初始阶段添加31.2 mU/g重组酶,麦汁的过滤速度提高了12.8%。以大麦麦芽阿拉伯木聚糖为底物,α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶与木聚糖酶有较好的协同作用。

• 单位
  工业生物技术教育部重点实验室; 江苏省农垦麦芽有限公司; 生物工程学院; 江南大学