摘要
目的评价下丘脑外侧区星形胶质细胞NOD样受体相关蛋白3(NLRP3)在小鼠失血性休克复苏后焦虑样行为中的作用。方法清洁级雄性C57BL/6小鼠48只, 10周龄, 体质量25~30 g, 采用随机数字表法分为4组(n=12):假手术组(C组)、失血性休克复苏组(H组)、失血性休克复苏+腺病毒组(HI组)和失血性休克复苏+对照腺病毒组(HIV组)。H组、HI组和HIV组小鼠通过股静脉放血-回输法建立失血性休克复苏模型;建模前21 d时, HI组小鼠在立体定位仪引导下向双侧下丘脑外侧区注射AAV-GfaABC1D-EGFP-Cre腺病毒, HIV组注射AAV-GfaABC1D-EGFP对照腺病毒。复苏后14 d时, 采用埋珠实验和高架十字迷宫实验评估焦虑样行为;行为学实验结束后立即处死小鼠, 取含有下丘脑外侧区的脑组织, 采用免疫荧光染色法, 测定紫藤凝集素荧光强度反映细胞外基质表达, 测定NLRP3和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)共定位情况, 计算cleaved caspase-1/GFAP、IL-18/GFAP阳性细胞数占总细胞的百分比。结果与C组比较, H组、HI组和HIV组埋珠数量减少, 开放臂停留时间百分比降低, 下丘脑外侧区细胞外基质表达下调, cleaved caspase-1/GFAP和IL-18/GFAP阳性细胞百分比增加, HI组NLRP3与GFAP共定位系数降低(P<0.01)。与H组比较, HI组埋珠数量增加, 开放臂停留时间百分比降低, 下丘脑外侧区细胞外基质表达上调, NLRP3与GFAP共定位系数降低, cleaved caspase-1/GFAP和IL-18/GFAP阳性细胞百分比降低(P<0.01), HIV组上述指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论小鼠失血性休克复苏后焦虑样行为与下丘脑外侧区星形胶质细胞NLRP3诱发焦亡, 减少细胞外基质有关。
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单位河北医科大学; 沧州市中心医院