污染水产去甲基化表观遗传毒性EGFP评价方法

作者：王先良; 满江红; 王春辉; 江艳; 王小利; 杨怡姝; 王菲菲; 赵秀阁; 李琴; 段小丽; 张衍燊; 张金良

来源：中国科学:化学 , 2011, (09): 1548-1554.

• 去甲基化
• 表观遗传毒性
• 评价载体
• EGFP
• 污染物 demethylation
• epigenetic toxicity
• evaluation vector
• pollutants

pEGFP-C3质粒经过体外人工甲基化处理后,被转染进入HepG2细胞以构建重组细胞株.以5-AZA为阳性去甲基化毒物与重组细胞共培养,通过亚硫酸氢钠测序法定量检测EGFP基因启动子区甲基化状态,通过实时定量PCR检测EGFP基因表达,借助流式细胞术和荧光摄片定量检测共培养细胞的绿色荧光强度,在DNA甲基化、EGFP基因mRNA表达、GFP蛋白等多个层次研究5-AZA染毒处理与其去甲基化能力和荧光表达改变的响应关系.对天津污染水产的去甲基化能力进行了实际样品测试.结果表明,5-AZA与重组细胞的DNA甲基化、基因表达、蛋白产物变化之间存在显著关联,具有较低的检出浓度和良好的重复性.天津污染海域...

• 单位
  中国环境科学研究院; 厦门大学; 环境基准与风险评估国家重点实验室; 安徽医科大学; 公共卫生学院; 北京工业大学; 生物工程学院