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摘要
为实现葡萄生产中对葡萄卷叶伴随病毒-3(GLRaV-3)的快速检测。本研究以GLRaV-3的CP基因序列(GenBank登录号：KC477128.1)为靶序列设计并合成了3对逆转录环介导恒温扩增技术(RTLAMP)引物，建立并优化GLRaV-3的RT-LAMP检测方法。结果表明，该方法能够实现在恒温64℃下反应1 h完成对GLRaV-3的检测，引物GLRaV3-LAMP-Ⅰ特异性高，不与GLRaV-1～2、葡萄扇叶病毒、沙地葡萄茎痘相关病毒、葡萄病毒A、灰皮诺葡萄病毒和葡萄浆果内坏死病毒等7种葡萄常见病毒发生交叉反应；RNA最低检测限为10 pg·μL-1，灵敏度是逆转录PCR(RT-PCR)的10倍。田间样品检测验证结果表明，该方法与常规RT-PCR法检测一致率为100%。综上，本研究建立的GLRaV-3 RT-LAMP检测体系具有高特异性、高灵敏度和实用性强等特点，可应用于田间葡萄卷叶病样的检测。
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