C3aR激动剂对小鼠原代肾小管上皮细胞表型的影响

作者：张志诚; 赵文紧; 郑敬民

来源：医学研究生学报, 2017, 30(01): 14-20.

DOI：10.16571/j.cnki.1008-8199.2017.01.004

• 肾小管上皮细胞
• 原代培养
• C3aR激动剂
• 上皮-间质细胞转分化

目的细胞转分化(EMT)过程中的关键事件包括上皮细胞蛋白(E-钙黏蛋白)的表达下调,细胞活动性增加,细胞基质生成的增多等。文中构建鼠原代肾小管上皮细胞培养及鉴定的方法,探究C3aR活化是否能够引起小管上皮细胞发生上皮-间质细胞转分化。方法用鼠肾小管节段进行肾小管上皮细胞原代培养,以免疫细胞化学及免疫荧光染色对上皮细胞进行鉴定。实验分为正常对照组,C3aR激动剂设5个浓度组:0.1、1、100、500及2000 ng/m L组,另设3个时间组:6、12及24 h组。利用Real-time PCR检测肾小管上皮细胞中E-钙黏蛋白、α-SMA及collagen I的表达水平变化;利用Western blot检测E-钙黏蛋白、α-SMA蛋白表达水平;用鬼笔环肽对上皮细胞行骨架染色,观察细胞骨架形态变化。结果与正常对照组比较,C3aR激动剂组(500 ng/m L、刺激48 h)抑制E-钙黏蛋白表达[(0.950±0.901)vs(0.650±0.221),P<0.05],上调α-SMA[(1.380±0.062)vs(1.600±0.103),P<0.05]和collagen I表达(P<0.05),且各自表达趋势与C3aR激动剂呈时间和剂量依赖关系。细胞骨架染色结果显示,随着C3aR激动剂刺激时间的延长,上皮细胞内由激动蛋白构成的应力纤维生成逐渐增多。结论成功构建了小鼠肾小管上皮细胞原代培养及鉴定的方法;C3aR活化能够促进肾小管上皮细胞发生上皮-间质细胞转分化,并在肾纤维化的发生发展中起一定作用,预示C3aR可能成为肾疾病治疗的新靶点。

• 单位
  南方医科大学; 南京军区南京总医院