牛病毒性腹泻病毒SYBR Green I实时定量RT-PCR检测方法的建立及应用

作者：韩猛立; 黄新; 钟发刚^*; 唐思静

来源：新疆农业科学, 2014, 51(02): 333-339.

• 牛病毒性腹泻病毒
• 实时荧光定量RT-PCR
• SYBR Green I

【目的】在建立一种快速定量的用于检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的实时荧光定量RT-PCR检测方法。【方法】根据GenBank公布的BVDV 5’端非编码区(5’UTR)核苷酸序列,软件分析后设计特异性扩增引物,建立SYBR Green I实时荧光定量PCR方法。【结果】建立的方法只能检测到BVDV,而与猪瘟病毒、牛传染性鼻气管炎病毒、牛轮状病毒及牛冠状病毒没有交叉反应,具有高度的特异性;在102108copies/μL模板范围内具有良好的线性关系,所制作的标准曲线相关系数为0.998,最低可检测下限可达到102copies/μL,具有灵敏度高的特点;不同情况下3次重复实验,变异系数均小于1.5%,具有重复性好的特点。【结果】成功建立了一种用于检测BVDV的实时荧光定量RT-PCR技术,并可用于临床样品的检测,适用于BVDV的快速诊断和流行病学调查。

• 单位
  新疆生产建设兵团; 新疆农垦科学院畜牧兽医研究所; 巴音郭楞职业技术学院