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摘要
目的设计一种弹回引物荧光PCR方法鉴定军团菌属和嗜肺军团菌。方法通过分析军团菌16S rRNA基因序列,采用生物信息学方法设计引物,优化实验条件,对方法的特异性、灵敏度进行评估,并对186株环境军团菌分离株与15份环境水样进行鉴定。结果经弹回引物检测,军团菌属菌株在85℃86℃处有扩增子熔解峰,嗜肺军团菌在71℃处有探针结合区熔解峰,非军团菌未检测到熔解峰。弹回引物对标准菌株DNA与模拟水样灵敏度分别为1 ng/μl与(1×1031×104)/ml。弹回引物对环境分离株验证实验中,成功鉴定了186株军团菌和44株嗜肺军团菌;对15份环境水样直接检测,检出12份军团菌属阳性水样与4份嗜肺军团菌阳性水样。结论弹回引物荧光PCR方法可用于军团菌属和嗜肺军团菌的鉴定,具有较高的特异性与灵敏度。
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