Annexin A2基因敲除MDCK细胞系的构建

作者：黄静; 高洁; 夏苏苏; 金志颖; 康琳; 高姗; 杨浩; 辛文文^*; 赵宝华^*; 王景林^*

来源：动物医学进展, 2019, 40(05): 13-17.

DOI：10.16437/j.cnki.1007-5038.2019.05.003

• Crispr/Cas9技术
• 基因敲除
• Annexin A2
• MDCK细胞系

应用Crispr/Cas9基因编辑技术敲除MDCK细胞中的Annexin A2基因,并验证其是否为ε毒素在MDCK细胞表面的受体。根据Crispr/Cas9靶点设计原则设计靶点,构建PALentiCRISPR v2重组质粒。借助Crispr/Cas9技术,将构建好的质粒转染至MDCK细胞中,用嘌呤霉素筛选敲除Annexin A2蛋白的MDCK细胞株,并通过测序和Western blot验证敲除效果。通过细胞毒性试验验证MDCK细胞膜表面的Annexin A2蛋白是否为ε毒素的受体蛋白。测序结果和Western blot结果表明,通过Crispr/Cas9技术成功敲除了MDCK细胞的Annexin A2基因,但细胞毒性试验结果表明,敲除Annexin A2基因并不能减弱ε毒素对MDCK细胞的毒性。结果表明,Annexin A2蛋白不是ε毒素在MDCK细胞表面的受体,研究结果为今后MDCK细胞其他蛋白的敲除提供了试验方法,构建的Annexin A2基因敲除的MDCK细胞也为Annexin A2蛋白引起的其他疾病的研究奠定了基础。

• 单位
  河北师范大学; 病原微生物生物安全国家重点实验室