二草清肝汤抑制LPS引起肝损伤的TLR4及其下游信号分子表达

作者：万苗; 欧阳钦^*; 吴春明; 刘三海; 赵安静

来源：浙江中医杂志, 2022, 57(01): 4-7.

DOI：10.13633/j.cnki.zjtcm.2022.01.002

• 二草清肝汤
• LPS
• TLR4/NF-κB
• 急性肝损伤
• 小鼠

目的:研究二草清肝汤(EQD)对内毒素脂多糖(LPS)联合D-氨基半乳糖(D-GalN)致小鼠急性肝损伤模型的:Toll样受体4(TLR4)信号通路的作用。方法:将21只BALB/C小鼠随机分为四个组:空白对照组(n=3)、内毒素模型组(n=7),均给予氯化钠溶液灌胃(3ml/kg);二草清肝汤小剂量组(n=6)、大剂量组(n=5)分别予生药含量为3.3g/ml、6.6g/ml的EQD溶液灌胃(3ml/kg)。每日1次,连续12天。最后一天灌胃4h后,除空白对照组外,其余组所有小鼠均腹腔注射LPS和D-GalN混合液造模,腹腔注射24h后,处死所有小鼠,剖取其肝脏称重、HE染色显微观察病理;各组小鼠TLR4、NF-κB表达情况,应用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法从RNA水平检测、WB法从蛋白表达水平定量测定;TLR4蛋白表达应用免疫组化法。结果:内毒素性肝损伤小鼠肝重均较空白对照组低,加入二草清肝汤后小鼠肝重上升;病理结果显示空白组小鼠的肝小叶轮廓界限分明、清晰且完整,肝窦散布有序、较宽;肝上皮细胞排列规整、呈多边形;细胞质染色均匀、细胞核清晰、未见明显肿胀变性,库普弗细胞分布均匀,未见周部大量聚集。内毒素模型组中巨噬细胞聚集,肝小叶结构混乱、排列无序;肝细胞脂肪沉积、水肿明显较空白组严重;而二草清肝汤组病变则较前改善。免疫组化结果说明内毒素处理后的模型组中TLR4蛋白表达显著上升,加入大剂量二草清肝汤后TLR4稍有下降(P<0.05);PCR结果显示内毒素处理后的模型组中TLR4、NF-κB mRNA表达下降,加入二草清肝汤后明显上升(P<0.05)。结论:二草清肝汤能够抑制肝细胞内TLR4信号通路的激活及相关炎症分子活化,改善LPS导致的肝损伤,其机制可能是EQD影响TLR4通路关键分子的蛋白翻译过程。

• 单位
  浙江中医药大学