抑制金黄色葡萄球菌的乳酸菌抗菌肽基因筛选及表达鉴定

作者：任大勇; 朱剑威; 刘宏妍; 于寒松

来源：食品与机械, 2018, 34(09): 1-5.

DOI：10.13652/j.issn.1003-5788.2018.09.001

• 乳酸菌
• 抗菌肽
• pET28a
• 金黄色葡萄球菌

以具有抑菌效果的L2、L16、L19等7株乳酸菌为模板,通过PCR扩增验证部分菌株中含有PlnF、PlnE、PlnN、PlnJ、PlnK等抗菌肽基因,以pET28a为载体并在抗菌肽基因两端引入Nco I和Xho I酶切位点,经双酶切和T4连接酶反应构建pET28a-抗菌肽重组质粒,转化E.coli BL21(DE3),培养至OD600=0.6时,加入0.5mmol/L的IPTG诱导6h,菌体在400 W、超声4s、间歇5s条件下破碎后以8mol/L尿素进行变性处理和Ni柱纯化透析复性后的蛋白与相对应未纯化的蛋白相比,仅PlnF纯化蛋白对金黄色葡萄球菌具有抑菌效果[抑菌圈直径为(13.43±0.21)mm],而其他蛋白几乎无抑菌活性。进一步通过Tricine-SDS-PAGE电泳和nanoLC-ESI-MS/MS验证,目的蛋白与PlnF抗菌肽具有97.6%的同源性。

• 单位
  吉林农业大学