Marc-145细胞PKR基因遗传分析与表达

作者：管宇; 杨慧; 于雪; 郭广君; 唐娜; 魏凤; 沈志强; 肖跃强^*

来源：动物医学进展, 2022, 43(12): 61-66.

DOI：10.16437/j.cnki.1007-5038.2022.12.017

• Marc-145细胞
• 蛋白激酶R
• 克隆
• 序列分析
• 融合表达

旨在克隆Marc-145细胞蛋白激酶R(PKR)基因，对其进行遗传特性及表达研究。利用RT-PCR克隆获得Marc-145细胞PKR基因，并对其核苷酸序列及推导的氨基酸序列进行同源性与遗传进化分析；将该基因分别插入pEGFP-C1与pEGFP-N1多克隆位点，构建增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合真核重组质粒，转染HEK293细胞，通过荧光显微镜观察、Western blot检测EGFP标签，开展PKR融合表达研究。结果显示，成功克隆获得Marc-145细胞PKR基因，编码区为1 653 bp,推导编码550个氨基酸，与选取的灵长类及哺乳动物参考物种PKR基因核苷酸序列同源性在72.2%～99.8%之间，氨基酸序列同源性在55.4%～99.5%之间，与豚鼠及其供体物种非洲绿猴(Cercopithecus aethiops)同源性分别为最低、最高；成功构建了EGFP-PKR融合质粒，但荧光蛋白观察及Western blot检测表明，仅C端融合质粒成功表达。结果表明，成功克隆了Marc-145细胞PKR基因并进行了融合表达，为进一步开展猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)在感染细胞与细胞内复制增殖时PKR所发挥的作用、PRRSV与细胞固有免疫抗病毒互作机制等研究奠定了基础。

• 单位
  山东省滨州畜牧兽医研究院