枯草芽孢杆菌表面展示氨肽酶的构建及协同水解大豆蛋白

作者：袁晓黎; 李青云; 刘幽燕; 李进; 白雪; 唐爱星^*

来源：化工进展, 2023, 1-9.

DOI：10.16085/j.issn.1000-6613.2023-0368

• 氨肽酶
• 表面展示
• 枯草芽孢杆菌
• 大豆蛋白
• 协同水解

氨肽酶是蛋白质深度水解的重要协同酶，但游离酶使用成本高且稳定性差，限制了其工业化应用。本研究利用表面展示技术将来源于铜绿假单胞菌GF31的氨肽酶基因Aps展示到Bacillus subtilis WB800N芽孢的表面，构建了一种易分离且稳定性好的新型全细胞生物催化剂。通过免疫荧光分析，证明氨肽酶在芽孢表面正确表达。在最适反应温度60℃、pH=9.0的条件下，氨肽酶活力最高可达75.61U/g芽孢。将表面展示氨肽酶协同碱性蛋白酶水解大豆蛋白，在60℃，碱性蛋白酶与表面展示氨肽酶加入比例为2:1，水解pH值先为10.0后为9.0的条件下，水解5.0%的大豆蛋白8h，水解度最高可达55.50%，分别是表面展示氨肽酶与碱性蛋白酶单独水解时的3.3倍、1.5倍。同时16种游离氨基酸含量大幅度提升，其中疏水性氨基酸亮氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸含量分别增加19.21mg/L、8.59mg/L和16.77mg/L，鲜味氨基酸谷氨酸、天冬氨酸含量增加13.98mg/L和4.11mg/L，说明表面展示氨肽酶在蛋白质的深度水解及对蛋白水解液脱苦、增鲜方面具有显著的作用，具有良好的工业应用前景。

• 单位
  广西大学; 化学化工学院