含多酶切位点融合黄色荧光蛋白的植物通用载体的构建与应用

作者：匡琛; 朱晓义; 张亮; 范世航; 华玮^*

来源：江苏农业科学, 2019, 47(16): 56-62.

DOI：10.15889/j.issn.1002-1302.2019.16.012

• 多酶切位点
• 黄色荧光蛋白
• 通用载体
• 激光共聚焦
• 植物基因表征工具

以植物表达载体pCAMBIA3301为基本骨架,以黄色荧光蛋白(yellow fluorescent protein,简称YFP)为标签蛋白构建可融合目标蛋白的表达载体,并包含可用于外源基因插入的单一识别位点的核酸酶酶切位点(SpeⅠ、XbaⅠ、SmaⅠ、BamHⅠ)。为了验证载体的实用性,将构建完成的载体转化到感受态GV3101农杆菌上,进行菌落PCR鉴定,再分别瞬时转化烟草下表皮和稳定转化拟南芥。激光共聚焦显微镜观察结果显示,在阳性转基因植株上均观察到荧光,在阴性对照上没有观察到荧光,表明YFP标签蛋白在转基因受体细胞中能够正常表达。pCAMBIA3301::YFP载体的成功构建为植物蛋白亚细胞定位及过表达转基因植株等相关领域的研究提供了稳定可靠的通用型载体资源。

• 单位
  中国农业科学院油料作物研究所; 中国农业科学院研究生院