三种噬菌体裂解基因对大肠杆菌致死效果的比较

作者：张远星; 李**; 余子豪; 查帆; 李倩文; 余旭平^*

来源：中国预防兽医学报, 2019, 41(12): 1268-1274.

• 噬菌体裂解基因
• 过表达
• 致死性

为比较3种噬菌体裂解基因M-lysis、mE和E对大肠杆菌的致死效果,本研究将噬菌体裂解基因M-lysis、mE和E克隆于严谨调控的高效表达载体pN15E6中,构建重组质粒pN15E6-M-lysis、 pN15E6-mE和pN15E6-E,分别转化入JM109和DH31soplacI二种大肠杆菌中,观察重组大肠杆菌在含IPTG诱导剂平板培养基上的生长情况,判定M-lysis、mE、E基因过表达对大肠杆菌宿主的影响。结果显示,在大肠杆菌JM109菌株中,mE基因过表达仅表现出抑制细菌生长的效果;M-lysis基因过表达部分致死细菌,存活菌生长受到抑制;E基因过表达能够致死绝大部分细菌,但有少量耐受菌生长。在大肠杆菌DH31soplacI菌株中,M-lysis与mE基因过表达也能致死绝大部分细菌,有少量耐受菌生长;而E基因过表达则完全致死涂布于平板上经106稀释的菌株,未见任何菌落生长。将重组菌株稀释后经平板菌落计数,测得M-lysis、mE、E基因过表达后对DH31soplacI菌株致死率分别为99.03%、99.68%和99.9998%,表明E基因过表达后对宿主菌的致死作用最强;同时定期测定培养的3种重组菌OD600nm值,并绘制生长曲线,结果显示过表达E基因能够迅速致死和裂解细菌。本研究为进一步开发噬菌体裂解肽奠定基础,也为探究细菌致死机理提供了一种新模型。

• 单位
  浙江大学; 动物科学学院