NF-κB/p65特异的RNAi腺病毒载体的构建及其对p65表达的抑制效应

作者：陈刚; 乔玉芳; 林旭; 姚瑾; 林苗; 游婷婷; 沈晓燕; 朱香清; 牟伦盼; 林丽香

来源：中华内分泌代谢杂志, 2007, 23(04): 363-367.

DOI：10.3760/j.issn:1000-6699.2007.04.022

• RNA干扰
• 腺病毒科
• 基因沉默
• NF-κB
• ECV304细胞

目的构建NF-κB p65亚基特异的RNA干扰(RNAi)腺病毒表达载体,并验证其对p65亚基的基因沉默效应。方法设计合成三对针对p65 mRNA不同位点的短发夹RNA(shRNA)编码序列,克隆到穿梭载体中,通过体外同源重组将短干扰RNA(siRNA)表达盒转移到腺病毒骨架质粒,构建RNAi腺病毒表达载体;在HEK293A细胞中包装并扩增病毒、空斑实验法进行病毒滴度测定;腺病毒感染人脐静脉内皮细胞株ECV304细胞,Western印迹法和免疫细胞化学法验证构建的RNAi腺病毒对p65蛋白表达的抑制效应。结果成功构建了NF-κB p65亚基特异的RNAi腺病毒表达载体,获得高滴度的腺病毒液;RNAi腺病毒感染ECV304细胞后可以高效抑制p65蛋白的表达,且对p65蛋白表达的抑制作用可持续6 d以上。结论应用RNAi腺病毒表达载体能有效阻断目的基因的表达。

• 单位
  福建医科大学