hCAP基因真核表达载体的构建及蛋白的表达和定位

作者：沈涛; 梁峰; 杨礼庆; 李妍; 梁爽; 薛峰; 付勤

来源：细胞与分子免疫学杂志, 2012, 28(02): 141-143.

DOI：10.13423/j.cnki.cjcmi.006279

• hCAP
• Western blot
• 绿色荧光蛋白
• 质粒构建

目的:构建hCAP真核表达载体并检测融合蛋白在细胞内的表达及定位。方法:提取工具细胞CV-1的mRNA,反转录为cDNA。PCR扩增hCAP基因的cDNA全长,并将其克隆至pEGFP-C1表达载体中。进一步将构建的重组载体进行酶切和测序鉴定,并转染到工具细胞COS-7中,提取细胞蛋白进行Western blot。最后利用激光共聚焦显微镜观察pEGFP-hCAP在NIH3T3成纤维细胞内的定位。结果:hCAP基因cDNA全长克隆到了真核表达载体pEGFP-C1中,酶切鉴定片段为3 879 bp,测序证实成功。Western blot检测GFP-hCAP融合蛋白表达,相对分子质量(Mr)约为169 000。pEG-FP-hCAP在NIH3T3细胞中主要定位于细胞周边。结论:成功构建了真核表达载体pEGFP-hCAP,融合蛋白在NIH3T3细胞中主要定位于细胞周边。

• 单位
  中国医科大学附属盛京医院; 基础医学院; 中国医科大学