过表达和敲减ace-miR-3720对中华蜜蜂工蜂幼虫肠道的靶基因表达和重量的影响

作者：蔡宗兵; 王思懿; 王紫馨; 赵萧; 张凯遥; 郭意龙; 姚雨彤; 钱加珺; 胡颖; 付中民; 陈大福^*; 郭睿^*

来源：昆虫学报, 2022, 65(10): 1247-1255.

DOI：10.16380/j.kcxb.2022.10.001

• 中华蜜蜂
• 幼虫
• 肠道
• 微小RNA
• ace-miR-3720
• 靶基因
• 过表达
• 敲减

【目的】本研究旨在明确ace-miR-3720在中华蜜蜂Apis cerana cerana工蜂幼虫肠道发育中的功能，并为进一步探究ace-miR-3720调控肠道发育的分子机理提供理论和实验依据。【方法】根据ace-miR-3720的核苷酸序列设计合成相应的模拟物mimic-miR-3720和抑制物inhibitor-miR-3720,通过饲喂中华蜜蜂工蜂幼虫对ace-miR-3720分别进行过表达和敲减。采用RT-qPCR检测过表达和敲减ace-miR-3720后4-6日龄幼虫肠道内ace-miR-3720及其靶基因CKⅠ,MAPK1和βGBP1的相对表达量；使用分析天平称重过表达和敲减ace-miR-3720后的幼虫肠道重量。【结果】相较于无义模拟物(nonsense mimic, mimic-NC)组，mimic-miR-3720组中ace-miR-3720表达量在中华蜜蜂4和5日龄幼虫肠道中均极显著上调，在6日龄幼虫肠道中显著上调；相较于无义抑制物(nonsense inhibitor, inhibitor-NC)组，inhibitor-miR-3720组中ace-miR-3720表达量在4日龄幼虫肠道中极显著下调，在5和6日龄幼虫肠道中显著下调。ace-miR-3720与基因CKⅠ,MAPK1和βGBP1之间存在潜在靶向关系。与mimic-NC组相比，mimic-miR-3720组中CKⅠ表达量在4和5日龄幼虫肠道中皆极显著下调，在6日龄幼虫肠道中显著下调；MAPK1表达量在4日龄幼虫肠道中显著下调，在5和6日龄幼虫肠道中均极显著下调；βGBP1表达量在4日龄幼虫肠道中显著下调，在5和6日龄幼虫肠道中均极显著下调；此外，4和5日龄幼虫肠道重量均极显著降低，6日龄幼虫肠道重量显著降低。与inhibitor-NC组相比，inhibitor-miR-3720组中CKⅠ表达量在4-6日龄幼虫肠道中皆极显著上调；MAPK1表达量在4日龄幼虫肠道中显著上调，在5和6日龄幼虫肠道中极显著上调；βGBP1表达量在4和6日龄幼虫肠道中显著上调，在5日龄幼虫肠道中极显著上调；此外，4和6日龄幼虫肠道重量显著升高，5日龄幼虫肠道重量极显著升高。【结论】ace-miR-3720在中华蜜蜂工蜂幼虫肠道内真实存在；通过饲喂模拟物和抑制物可对中华蜜蜂工蜂幼虫肠道内分别实现miRNA的有效过表达和敲减；ace-miR-3720可能通过调控CKⅠ,MAPK1和βGBP1的表达影响中华蜜蜂工蜂幼虫肠道重量并参与幼虫肠道发育。

• 单位
  动物科学学院; 福建农林大学