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摘要
【目的】为进一步分析III型中间丝蛋白Desmin的结构和生物学功能。【方法】设计Desmin基因的特异性引物，通过RT-PCR扩增和基因克隆，构建pGEX-4T-1-Desmin-FLAG原核表达载体和pcDNA3.0-Desmin-FLAG真核表达载体；对原核表达载体进行诱导表达，通过多种在线生物信息学软件对该基因编码蛋白的理化性质、信号肽、亲/疏水性、结构域、空间结构进行分析。【结果】通过RT-PCR扩增获得的鼠源Desmin基因条带1410bp，构建表达载体和优化表达条件，对pGEX-4T-1-Desmin-FLAG进行大肠杆菌原核诱导表达，用考马斯亮蓝染色和特异性的标签检测，显示成功表达出70 kD的Desmin-FLAG重组融合蛋白。将真核表达载体pcDNA3.0-Desmin-FLAG转染BHK-21细胞，Western blotting检测到Desmin蛋白和FLAG标签，显示Desmin蛋白在真核细胞成功表达，用激光共聚焦证明该蛋白主要定位在细胞质中。通过生物信息学分析，Desmin 蛋白理化性质不稳定，属亲水性蛋白，无跨膜结构域，不含有信号肽，α-螺旋是其主要的二级结构。【结论】作为神经肌肉接头处的重要蛋白，真核表达和原核表达载体的构建，可用于研究生物学功能，特别是在体外和细胞内的表达系统中鉴定Desmin的互作蛋白对其作用网络进行探索。
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单位亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室; 广西大学
