酶切质谱法和氰基化裂解法联合解析新药重组人门冬胰岛素二硫键

作者：黄亚娟; 傅海媛; 侯利平; 孙云波; 张拓; 王东茂; 郑俊杰; 魏开华

来源：药物分析杂志, 2013, (10): 1649-1655.

DOI：10.16155/j.0254-1793.2013.10.023

• 重组人门冬胰岛素
• 二硫键定位解析
• 半胱氨酸
• 肽质量指纹图谱
• 氰基化裂解
• 质谱分析 recombinant human insulin aspart
• position analysis of disulfide bond
• cysteine
• peptide mass fingerprinting
• cyanylation cleavage
• mass spectrometry analysis

目的:建立一种简化、快速、准确的分析含有相邻Cys的双链型二硫键的方法,并确定重组人门冬胰岛素的二硫键。方法:(1)ESI-Q-TOF质谱准确测定样品还原烷基化及烷基化前后的相对分子质量,计算二硫键数和自由巯基数;(2)采集Glu-C酶切肽质量指纹谱,MS-Bridge检索并确定1对链间二硫键;(3)简化氰基化裂解法步骤,LC-MS/MS测定关键肽段序列,自编软件结合人工解析,确定第2、3对二硫键。结果:(1)相对分子质量测定出重组人门冬胰岛素含3对二硫键;(2)酶切肽谱的序列覆盖率为100%,关键肽段m/z 1377.5568、m/z 2493.1045,测量偏差小于0.05,对应二硫键A2...

• 单位
  中南大学; 北京蛋白质组研究中心; 蛋白质组学国家重点实验室; 军事医学科学院放射与辐射医学研究所