稳定表达UT-A2的FRT细胞系的建立与鉴定

作者：郭丽荣; 孟艳; 赵丹; 赵华山; 吕斌; 杨宝学; 赵雪俭

来源：中国病理生理杂志, 2007, (04): 803-806.

DOI：10.3321/j.issn:1000-4718.2007.04.041

• 尿素通道蛋白
• 转染
• 尿素

目的:建立稳定表达尿素通道蛋白A2(UT-A2)的FRT细胞系,为寻找UT-A2抑制剂提供细胞模型。方法:通过真核表达质粒-脂质体介导的方法,将UT-A2 cDNA与真核表达载体pUB6/V5连接后的重组质粒转染入FRT细胞,经稳定筛选建立稳定表达UT-A2的FRT细胞系。功能检测实验将细胞分为对照组和稳定转染组,用2 mol/L尿素负荷试验检测稳定表达UT-A2的FRT细胞膜的尿素通透性。结果:经BSD筛选21 d后得到稳定表达UT-A2的细胞株;Western blotting证实UT-A2蛋白稳定表达;免疫荧光分析结果提示UT-A2的质膜定位。2 mol/L尿素试验证实了该细胞系具有明显尿素通透性。结论:在非肾脏上皮细胞获得了稳定质膜定位表达UT-A2的FRT细胞株,该细胞株可用于UT-A2抑制剂的筛选。

• 单位
  基础医学院; 吉林大学