大鼠原代肝星状细胞分离、鉴定及培养方法的研究

作者：张玉; 周曦; 易龙; 马鑫; 张乾勇; 糜漫天

来源：局解手术学杂志, 2018, 27(01): 5-11.

• 肝星状细胞
• 细胞分离
• 原代培养
• 细胞鉴定

目的改进大鼠肝星状细胞(HSC)的分离、纯化方法,为肝相关疾病研究提供稳定细胞来源。方法采用严格控制灌注液温度、流速及灌注时间的肝逆向两步酶灌注法进行原位组织消化,并使用Pronase E/CollagenaseⅣ联合消化液体外消化肝组织,进而用Percoll密度梯度离心分离HSC细胞;台盼蓝拒染实验检测细胞存活率,CCK-8法测定细胞活力并制作细胞生长曲线;分别采用流式细胞术及免疫荧光细胞化学法对HSC细胞进行鉴定。结果采用改良方法后,每只大鼠分离收获的HSC细胞稳定在(2.1±0.2)×107个,存活率为(96.2±0.8)%,细胞生长状态良好;流式细胞分选测定具有自发荧光特性的HSC细胞所占比例为96.3%,免疫荧光细胞化学法检测分离的HSC细胞表达特征性表面抗原α-SMA和Desmin。结论采用严格控温、控流、控时的灌注方法及使用Pronase E/CollagenaseⅣ联合消化液有效提高了大鼠HSC细胞的收获数量、细胞活力和纯度,为进一步围绕HSC开展相关研究奠定了细胞基础。

• 单位
  中国人民解放军陆军军医大学; 第三军医大学