H5N1禽流感病毒微磁粒捕捉系统和SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR检测方法的建立

作者：张坤; 李刚; 贾凤芹

来源：中国兽医学报, 2009, (09): 1144-1148.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2009.09.008

• H5N1禽流感病毒
• 微磁粒捕捉系统
• 荧光定量RT-PCR H5N1 virus
• magnetic bead capture system
• SYBR Green Ⅰ real time RT-PCR

利用禽流感H1N1抗体包被微磁珠制备免疫磁珠,再通过抗原抗体反应得到了含有N1亚型的病毒,然后设计针对H5亚型的特异性引物,同时构建含有H5亚型HA基因部分序列的标准质粒,定量后作为模板,建立了可以检测H5亚型禽流感病毒的SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR(RRT-PCR)方法。结果表明,制备的免疫磁珠可以吸附4个血凝单位的H5N1流感病毒和5个血凝单位的H1N1流感病毒,而对H9N2亚型流感病毒无特异性结合,从而可以富集N1亚型的流感病毒。H5亚型RRT-PCR检测灵敏度可达到4.6拷贝/μL,线性范围达5个数量级;特异性强,与NDV和H1、H9亚型禽流感病毒不发生交叉反应。因此,利...

• 单位
  动物科技学院; 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所; 动物营养学国家重点实验室; 西南大学