PcDNA3.1-Tum-5基因真核表达载体的构建

作者：张军; 兰斌; 孙启强

来源：肿瘤基础与临床, 2010, (06): 461-463.

• 肿瘤抑素
• 质粒
• Tum-5基因
• 巢式PCR tumstatin
• plasmid
• Tum-5 gene
• nested PCR

目的构建携带Tum-5基因真核表达载体PcDNA3.1-Tum-5。方法利用巢式PCR扩增人胚肾细胞株HEK293 cDNA获得Tum-5基因,并利用DNA回收试剂盒进行回收;同时扩增、提取pcDNA3.1质粒,并将其与Tum-5基因分别进行EcoRV和XhoI双酶切,回收相应条带,通过T4DNA连接酶进行连接,转化DH5α感受态细胞,获得阳性克隆。获得质粒DNA后行KpnI和XhoI双酶切,克隆并测序酶切产物。结果巢式PCR扩增出的产物与目的基因大小相同;重组质粒经双酶切电泳分析,与预期结果一致;对连接点两端进行测序,结果显示接头两端序列连接正确,插入序列与载体读码框架相匹配。结论本方法可以...

• 单位
  福建医科大学附属第一医院