人白细胞介素24蛋白酵母双杂交诱饵载体的构建及其自激活检测

作者：黄晓萍; 郭建军; 范汉东; 杨一兵

来源：江西科学, 2011, 29(01): 47-50+108.

DOI：10.13990/j.issn1001-3679.2011.01.011

• 白细胞介素24
• 双杂交系统技术
• 自激活作用

构建人白细胞介素24蛋白酵母双杂交诱饵载体,并检测其自激活作用。采用PCR技术特异性扩增人白细胞介素24基因IL-24,将其克隆入酵母双杂交诱饵质粒pGBKT7中,通过PCR扩增、限制性酶切鉴定及序列测定,获得质粒pGBKT7-IL-24。采用PEG/L iAc法将其转入酵母AH109中,经表型筛选检测其自激活作用,同时利用对照质粒组筛选组氨酸(H is)本底表达抑制剂3-AT的合适工作浓度。结果获得了无自激活作用的诱饵载体pGBKT7-IL-24。确定了组氨酸(H is)本底表达抑制剂3-AT的最佳工作浓度。结论:诱饵质粒pGBKT7-IL-24可以用于酵母双杂交实验,为进一步运用酵母双杂交技术在人类组织cDNA文库中筛选与之相互作用的蛋白奠定了基础。

• 单位
  江西省科学院微生物研究所