科研之友
微信
新浪微博
Facebook
分享链接
摘要
本研究旨在表达非洲猪瘟病毒（ASFV）衣壳蛋白pE120R，并制备单克隆抗体，为其功能研究提供材料。以pCAGGS-Flag-pE120R为模板扩增pE120R基因片段，构建原核表达质粒pGEX-6p1-pE120R。将其转化BL21（DE3）感受态细胞后经IPTG诱导表达为可溶性pE120R蛋白，采用GST Beads纯化pE120R蛋白，免疫BALB/c小鼠，然后取其脾细胞与SP2/0细胞进行细胞融合，采用间接ELISA方法筛选获得了1株能够稳定分泌pE120R单克隆抗体的杂交瘤细胞株。结果表明，成功构建了原核表达质粒pGEX-6p1-pE120R，并获得较高纯度的pE120R蛋白。Western blot（WB）和间接免疫荧光（IFA）试验结果显示，pE120R单抗能特异性识别HEK293T细胞转染质粒表达的Flag-pE120R蛋白和肺泡巨噬细胞（PAMs）感染ASFV后表达的pE120R蛋白。该单抗的结合位点在30-60aa区域，并且该单抗亚类鉴定重链为IgG2a。本研究成功表达并纯化了可溶性的pE120R蛋白；制备了抗pE120R的单抗隆抗体，该抗体具有良好的特异性，为深入探讨ASFV pE120R蛋白的生物学功能奠定了基础。
- 单位
