TaqMan-MGB多重荧光定量PCR检测PCV2、PCV3和PCV4方法的建立和应用

作者：韩勇; 刘玉洁; 吕桂霞; 马珍驰; 任增超; 范承祥

来源：中国兽医杂志, 2023, 59(08): 29-34.

• 猪圆环病毒2型
• 猪圆环病毒3型
• 猪圆环病毒4型
• 荧光定量PCR
• 净化

为建立一种可同时鉴别致病性猪圆环病毒(PCV)不同基因型的检测方法，本试验针对PCV2、PCV3和PCV4的ORF2基因保守区域设计引物和探针，将人工合成目的基因与质粒连接，构建阳性质粒PCV2-ORF2、PCV3-ORF2和PCV4-ORF2。通过优化引物浓度、探针浓度、退火温度等参数，建立PCV2、PCV3和PCV4 TaqMan-MGB多重荧光定量PCR检测方法，并验证该方法的特异性、敏感性和重复性。应用建立的方法对38份临床样品进行应用检测，对24个养猪场(户)进行流行病学调查。结果显示，建立的方法能特异性区分PCV2、PCV3和PCV4,且与其他常见猪病病原不发生交叉反应；对PCV2、PCV3和PCV4的最低检出浓度分别为1.56×10、1.28×10和1.76×10拷贝/μL;批内和批间变异系数均小于2%,重复性好；38份临床样品中PCV2、PCV3和PCV4阳性样品分别为17、3和1份，从24个养猪场(户)采集的689份样品中PCV2、PCV3和PCV4阳性率分别为33.33%、12.50%和8.33%。结果表明，本试验建立的PCV2、PCV3和PCV4 TaqMan-MGB多重荧光定量PCR检测方法特异性强、敏感性高、重复性好，可用于PCV的快速分型检测，为PCV的临床诊断和流行病学调查提供了检测工具。