大鼠星状细胞激活相关蛋白基因的克隆及其重组腺相关病毒载体的构建

作者：李欣燕; 许瑞安; 王广基; 马宏; 谢海棠; 赵小辰; 陈淼

来源：药物生物技术, 2005, (06): 351-353.

DOI：10.19526/j.cnki.1005-8915.2005.06.001

• 星状细胞激活相关蛋白
• 腺相关病毒

克隆大鼠星状细胞激活相关蛋白(Stellate Cell Activation-associated Protein,STAP)基因,构建其重组腺相关病毒载体(rAAV-STAP),为进一步研究STAP基因功能提供有效工具。用RT-PCR法从大鼠肝组织中扩增出大鼠STAP基因,将STAP cDNA插入腺相关病毒(AAV)表达质粒pAM/CAG中,构建重组质粒pAM/CAG-STAP。以磷酸钙共转染法将pAM/CAG-STAP及辅助质粒pAd/H22转染293细胞,经293细胞包装后得到复制缺陷型重组腺相关病毒rAAV-STAP。ELISA法测定病毒滴度,Western blot法检测重组病毒感染293细胞后STAP的表达情况。实验结果表明,RT-PCR法从大鼠肝组织中扩增出573bp cDNA,测序证实为大鼠STAP基因。Western blot法证实rAAV-STAP感染293细胞后可在细胞内表达STAP。

• 单位
  协和医科大学; 中国药科大学