黄芪-白花蛇舌草抑制肺癌A549细胞增殖机制

作者：孙海鹏; 马山; 庄贺; 赵粤; 孙平一; 刘思远^*

来源：中国实验方剂学杂志, 2021, 27(19): 28-35.

DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20211922

• 黄芪-白花蛇舌草
• A549肺癌细胞
• 白细胞介素-6(IL-6)
• 缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)
• 增殖

目的:从细胞水平观察黄芪-白花蛇舌草对人肺腺癌A549细胞增殖及白细胞介素-6(IL-6),磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K),蛋白激酶B(Akt),磷酸化蛋白激酶B(p-Akt),雷帕霉素靶蛋白(m TOR),缺氧诱导因子-1α(HIF-1α),细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)表达量的影响,并探讨其作用的分子机制。方法:设立空白组(完全培养基),黄芪-白花蛇舌草低、中、高质量浓度组(20,40,60 mg·L-1),顺铂低、中、高质量浓度组(5,10,20 mg·L-1),采用噻唑蓝(MTT)比色法检测黄芪-白花蛇舌草(0,20,40,60 mg·L-1)和顺铂(0,5,10,20 mg·L-1)干预A549细胞24,48,72 h后的细胞活性,计算各组细胞增殖能力,筛选出各药物组最佳浓度;分别用完全培养基,黄芪-白花蛇舌草(40 mg·L-1),顺铂(10 mg·L-1),联合药物(40 mg·L-1+10 mg·L-1)干预肺腺癌A549细胞,设置为空白组、黄芪-白花蛇舌草组、顺铂组、联合组,计算各组在24,48,72 h后对A549细胞增殖抑制影响;采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测各组72 h后细胞培养上清中IL-6的水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测HIF-1α,Cyclin D1m RNA水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组蛋白PI3K,Akt,p-Akt,m TOR,HIF-1α,Cyclin D1表达的变化情况。结果:在作用细胞24 h后,各黄芪-白花蛇舌草组对细胞增殖未表现出明显抑制,作用48 h,与空白组比较,黄芪-白花蛇舌草组对肿瘤细胞有明显增殖抑制作用(P<0.05),表现出时间依赖性,在作用细胞72 h,黄芪-白花蛇舌草各浓度组未表现出明显差异,故选用40 mg·L-1为中药最佳浓度组,用于后续实验。与空白组比较,经过不同浓度顺铂干预后,细胞增殖均受到不同程度抑制(P<0.05),表现出明显的时间依赖性,基于细胞存活率考虑,选用顺铂10 mg·L-1为最佳浓度。与空白组比较,黄芪-白花蛇舌草与顺铂联合应用明显抑制肺腺癌A549细胞增殖,增殖抑制率表现出明显的时间依赖性(P<0.05),且药物作用72 h,联合组与其他两组比较差异更加显著(P<0.01);与空白组比较,各用药组细胞培养液IL-6分泌显著降低(P<0.01),以联合组下降更加突出。与空白组比较,黄芪-白花蛇舌草、顺铂均能降低HIF-1α,Cyclin D1m RNA水平(P<0.05,P<0.01),且联合用药降低幅度更加明显;各用药组PI3K,p-Akt,m TOR,HIF-1α,Cyclin D1蛋白均明显降低(P<0.05,P<0.01),且联合组各蛋白表达量明显低于顺铂组(P<0.01)。结论:黄芪-白花蛇舌草对肺癌A549细胞增殖具有抑制作用,潜在机制可能与其抑制IL-6/PI3K/Akt/m TOR-HIF-1α轴的表达与分泌有关。

• 单位
  山东中医药大学附属医院; 山东中医药大学第二附属医院; 山东中医药大学