自噬在右美托咪定减轻LPS致小鼠巨噬细胞炎症反应中的作用

作者：毛幸; 闫梦莹; 陈红光; 冯竞成; 王国林; 谢克亮; 于泳浩^*

来源：中华麻醉学杂志, 2018, 38(08): 992-995.

• 右美托咪啶
• 自噬
• 内毒素类
• 巨噬细胞
• 炎症

目的评价自噬在右美托咪定减轻LPS致小鼠巨噬细胞炎症反应中的作用。方法体外培养的小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞,细胞常规接种于6孔板或96孔板,待融合度为60%时,采用随机数字表法分为4组(n=20):对照组(Con组)、LPS组、LPS+右美托咪定组(LPS+Dex组)和LPS+右美托咪定+自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)组(LPS+Dex+3-MA组)。Con组加入PBS培养12 h;LPS组加入终浓度为1 000 ng/ml的LPS孵育12 h;LPS+Dex组先加入终浓度为1 000 ng/ml的LPS,随后立即加入终浓度为1μmol/L的右美托咪定孵育12 h;LPS+Dex+3-MA组先加入终浓度为2mmol/L的3-MA孵育1 h,再加入终浓度为1 000 ng/ml的LPS,随后立即加入终浓度为1μmol/L右美托咪定孵育12 h。采用CCK-8法检测细胞活力,采用ELISA法测定上清液NO、TNF-α和IL-1β的浓度,采用Western blot法测定微管相关蛋白轻链3Ⅰ(LC3Ⅰ)、LC3Ⅱ、泛素结合蛋白(P62)和Bcelin-1的表达水平,计算LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值。结果与Con组相比,LPS组巨噬细胞活力降低,TNF-α、IL-1β和NO的浓度升高,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高,P62和Beclin-1的表达上调(P<0.05);与LPS组相比,LPS+Dex组巨噬细胞活力升高,TNF-α、IL-1β和NO的浓度降低,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高,P62表达下调,Beclin-1表达上调(P<0. 05);与LPS+Dex组相比,LPS+Dex+3-MA组巨噬细胞活力降低,TNF-α、IL-1β和NO的浓度升高,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值降低,P62表达上调,Beclin-1表达下调(P<0.05)。结论自噬增强参与了右美托咪定减轻LPS致小鼠巨噬细胞炎症反应。

• 单位
  天津医科大学总医院