奶牛β-干扰素在大肠杆菌中高效表达和生物活性分析

作者：刘颖; 刘华兰; 杨利国; 陈焕春; 郭爱珍

来源：中国畜牧兽医, 2010, (01): 123-128.

• 奶牛
• β-干扰素
• 融合蛋白
• 抗病毒活性 bovine
• interferon-beta
• fusion protein
• antiviral activity

提取经植物血凝素诱导培养的中国健康奶牛外周血淋巴细胞总RNA,应用RT-PCR方法扩增出奶牛β-干扰素成熟蛋白基因并将其克隆到pMD18-T载体上。测序结果表明,扩增片段为奶牛β-干扰素成熟蛋白序列,与GenBank上发表的干扰素序列同源性为100%。将其重组到原核表达载体pET32a(+)上,并在大肠杆菌BL21中实现了高效表达。表达产物以His-Tag融合蛋白的形式存在,表达量约占细菌总蛋白的40%。用镍亲和层析法对蛋白进行纯化,并利用VSV-MDBK/IBRV细胞系统分析其生物活性。重组奶牛β-干扰素抗病毒活性分别约3.16×105U/mL,7.5×104U/mL。结果表明,重组奶牛β-...

• 单位
  动物科技学院; 华中农业大学; 农业微生物学国家重点实验室