热打击单核细胞外泌体高迁移率族蛋白B1对内皮细胞炎症的作用

作者：张明; 杨**; 李悦; 施学智; 李华楚; 童华生^*

来源：解放军医学杂志, 2023, 48(06): 670-675.

• 中暑
• 外泌体
• 单核细胞
• 高迁移率族蛋白B1

目的 观察热打击单核细胞外泌体高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对内皮细胞炎症的作用。方法 制备中暑大鼠模型，将大鼠分为对照组(n=6)与中暑组(n=6)，分离单核细胞提取外泌体并进行鉴定；对外泌体蛋白进行质谱分析并采用注释数据库进行功能描述；采用Western blotting及酶联免疫吸附法(ELISA)分别验证中暑大鼠及患者单核细胞来源外泌体HMGB1的表达变化；将脐静脉内皮细胞(HUVECs)分为对照组、中暑组以及中暑+丙酮酸乙酯(ethylpyruvate,EP)组，分别添加来自对照组、中暑组大鼠外周血单核细胞上清中提取的外泌体及EP，采用RT-qPCR及Western blotting检测内皮细胞NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)及白细胞介素-1β(IL-1β)的表达水平；采用ELISA检测健康志愿者及中暑患者外泌体NLRP3及IL-1β的表达水平。结果 与对照组比较，中暑组大鼠单核细胞来源外泌体数量(×104/单核细胞)明显增多(11.24±2.66vs.1.52±0.21,P<0.001)。蛋白质组学分析表明中暑组外泌体HMGB1表达较对照组上调18.63倍(P<0.001)，且在NOD样受体等信号通路富集。Western blotting检测结果显示，中暑组大鼠外泌体内含HMGB1表达量较对照组明显升高(4.13±0.22 vs. 1.00±0.15,P<0.001)。ELISA检测结果显示，中暑组患者外泌体内含HMGB1水平(ng/ml)较对照组明显升高(0.29±0.11 vs. 0.12±0.04,P=0.006)。RT-qPCR及Western blotting检测结果显示，与对照组比较，中暑组内皮细胞中NLRP3及IL-1β的mRNA和蛋白表达水平均明显升高，与中暑组比较，中暑+EP组NLRP3及IL-1β的mRNA和蛋白表达水平则明显降低，差异有统计学意义(P<0.05)。结论 热打击可提高单核细胞来源外泌体HMGB1水平，并可能通过HMGB1介导内皮细胞的炎症反应。

• 单位
  清远市人民医院; 广州医科大学