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摘要
目的:采用适当粒径大小的壳聚糖纳米颗粒(CS-NP)连接质粒DNA,观察CS-NP结合DNA的能力及介导基因转染的效率。方法:利用静电吸附作用连接CS-NP与报告基因pEGFP-N1,形成pEGFP-N1-CS-NP复合物。用透射电镜及激光粒度分析仪观察pEGFP-N1-CS-NP的形态、粒径大小、分布及Zeta电位。用琼脂糖凝胶电泳分析CS-NP与DNA结合能力,以比色法检测其包封率;用DNase I消化实验观察pEGFP-N1-CS-NP抗核酸酶降解的能力。体外转染A549细胞观察pEGFP-N1-CS-NP的转染活性。结果:激光粒度分析仪及透射电镜观察到pEGFP-N1-CS-NP呈较均匀的不规则球形,平均粒径约为100~200 nm,Ztea电位为16~22.8 mV。WCS-NP/WDNA≥4时,能有效地结合DNA,包封率>90%。CS-NP能有效介导pEGFP-N1转染A549细胞,并在A549细胞中表达绿色荧光蛋白。结论:CS-NP能有效地与质粒连接,并有很高的包封率,能保护DNA免受核酸酶的降解。CS-NP在体外能将报告基因转染入细胞内,并在细胞内表达。这些研究结果为采用CS-NP作为基因载体应用于活细胞及活体成像的研究奠定了基础。
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单位新桥医院
