miR-1322在低氧诱导动脉平滑肌细胞增殖中的作用及其机制

作者：周咏梅; 王斌; **; 张明周; 李瑾; 魏征华; 游节根; 贺斌峰^*

来源：第三军医大学学报, 2018, 40(21): 1948-1955.

DOI：10.16016/j.1000-5404.201805089

• miR-1322
• 低氧
• 人肺动脉平滑肌细胞
• 骨形成蛋白受体2
• 细胞增殖

目的研究miR-1322对低氧诱导人肺动脉平滑肌细胞(human pulmonary artery smooth muscle cells,HPASMCs)增殖的调控作用并探讨其机制。方法 HPASMCs在1%O2低氧中分别暴露0、6、12、24、48 h,利用RT-qPCR检测各个时间点miR-1322的表达,Western blot检测骨形成蛋白受体2(bone morphogenetic protein receptor 2,BMPR2)、p-smad1/5/9、p21的蛋白表达,CCK-8检测细胞增殖。将miR-1322抑制物(inhibitor)和阴性对照(negative control,NC)转染HPASMCs细胞24 h后再行低氧处理48 h,采用CCK-8检测12、24、48 h时细胞的增殖水平。利用双荧光素酶报告基因检测分析miR-1322是否绑定BMPR2 3’非编码区(untranslated regions,UTR)。采用Western blot检测miR-1322对BMPR2蛋白的调控作用。转染BMPR2过表达质粒24 h后,再进行低氧处理48 h,采用CCK-8检测12、24、48 h时细胞的增殖水平,Western blot检测p-smad1/5/9和p21的蛋白表达。结果 HPASMCs低氧暴露12、24 h和48 h组miR-1322的表达均显著高于0 h组(P <0. 05)。miR-1322 inhibitor组miR-1322表达显著低于NC组(P <0. 05)。miR-1322 inhibitor/低氧组在24、48 h时细胞增殖水平显著低于相同时间点的低氧组(P <0. 05)。荧光素酶报告基因结果显示BMPR2是miR-1322的靶点。上调miR-1322的表达后,BMPR2蛋白表达较NC组有显著的下降(P <0. 05);相反地,抑制miR-1322后,BMPR2蛋白的表达显著高于NC组(P <0. 05)。低氧6、12 h和24 h时,BMPR2和p21的蛋白表达较0 h组显著降低(P <0. 05),而p-smad1/5/9的蛋白表达显著升高。低氧下BMPR2过表达组p-smad1/5/9和p21的蛋白表达较空载体显著升高(P <0. 05); CCK-8检测结果显示过表达BMPR2组的细胞增殖水平显著低于空载体组(P <0. 05)。结论低氧促进miR-1322在HPASMCs中的表达;上调miR-1322通过抑制BMPR2介导p-smad1/5/9-p21通路,促进细胞的增殖。

• 单位
  南昌大学医学院; 江西省医学科学院; 中国人民解放军陆军军医大学; 第三军医大学