大粒咖啡炭疽病病原菌形态和分子鉴定及杀菌剂筛选

作者：李学俊; 任圆; 陈红梅; 曲鹏; 杜华波; 何鹏搏^*; 谭万忠^*

来源：热带作物学报, 2023, 1-12.

• 大粒咖啡
• 炭疽病
• 卡哈瓦刺盘孢
• 多基因序列分析
• 杀菌剂筛选

大粒咖啡是重要的遗传种质资源和风景园林植物，在部分地区有少量种植。咖啡炭疽病是影响咖啡生长发育和产量的重要真菌病害。本研究对感染炭疽病的大粒种咖啡叶片采用组织分离法的方法进行分离，分离数次纯化后进行组织培养，利用柯赫氏法则验证其致病性，结合菌株的形态学特征和多基因序列系统发育分析对病原菌进行鉴定；用菌落生长速率法对10种药剂进行抑菌率测定筛选。分离纯化获得了4个真菌纯培养菌株，通过科赫氏证病实验结果确认，菌株KFTJ01是导致大粒种咖啡炭疽病的病原菌。用PCR扩增成功获得KFTJ01菌株的rDNA-ITS、CAL和Tub2基因序列。其长度为554 bp、489bp和706bp。将它们分别上传到NCBI GenBank进行blast-n对比结果表明，KFTJ01与Colletotrichum kahawae的WZ-135(MN856281.1)、CREADC-ER2212 (MT409131.1)、和YMTJ4(MK569149.1)菌株的相似率分别达99.62%，100%和100%。用KFTJ01和下载的刺盘孢属同源种菌株的3个DNA序列构建的系统演化树上，KFTJ01与卡哈瓦刺盘孢(Colletotrichum kahawe)聚集于同一末端分枝上(可信度=98%)，因此将KFTJ01鉴定为卡哈瓦刺盘孢。这是我国的一个检疫对象物种，在咖啡类作物上尚未被报道过，需要引起我们的高度重视。杀菌剂筛选试验结果显示，70%甲基硫菌灵WP和30%肟菌·戊唑醇SA可完全抑制KFTJ01的生长(抑菌率均为100%)，它们的抑菌中浓度(EC50)分别为0.0607mg/mL和0.0809mg/mL，这显示两种药剂对抑制病菌非常经济有效。由此可见，引致大粒种咖啡炭疽病的病原菌为卡哈瓦刺盘孢(C. kahawae)，这是在我国尚未见报道的一种新记录咖啡炭疽病病原菌; 甲硫·乙唑醇和甲基硫菌灵对病原菌具有很好的抑菌效果。本研究结果为大粒咖啡炭疽病的准确诊断和防控提供了重要依据。

• 单位
  云南农业大学