rno-miR-129-5p对大鼠大麻素Ⅰ型受体基因3′-非编码区双荧光素酶活性的影响

作者：许婧怡; 徐君美; 李琛琛; 郭励劼; 郭梓钰; 张浩辰; 徐志卿; 杨予涛^*

来源：生物技术, 2022, 32(01): 21-28.

DOI：10.16519/j.cnki.1004-311x.2022.01.0004

• rno-miR-129-5p
• 大麻素Ⅰ型受体
• 抑郁症
• pmiR-CB1 R3′-UTR
• pmiR-CB1R-mut3′-UTR
• 双荧光素酶活性检测

[目的]探究rno-miR-129-5p对含有大鼠大麻素Ⅰ型受体(CB1R)基因3′-非编码区(UTR)双荧光素酶报告载体的调控作用。[方法]以大鼠前额叶皮层脑区和海马脑区cDNA为模板，利用聚合酶链式反应(PCR)扩增出含有rno-miR-129-5p与CB1R基因3′-UTR结合位点的目的片段。利用重叠延伸的方法将两个靶序列CAAAAA分别突变为CAGGCC,并将CB1R 3′-UTR和CB1R-mut 3′-UTR插入到pmiR-RB-ReportTM vector载体中。将rno-miR-129-5p mimic或其Negative control(NC)与野生型和突变型双荧光素酶报告载体共转染至PC12细胞后，检测其荧光素酶活性。[结果]成功构建了包含CB1R基因3′-UTR野生型双荧光素酶报告载体pmiR-CB1R 3′-UTR和突变型双荧光素酶报告载体pmiR-CB1R-mut 3′-UTR。荧光素酶活性检测发现rno-miR-129-5p mimic可以下调野生型报告载体的活性(P<0.05),而对突变型没有影响。[结论]初步证明CB1R基因3′-UTR是rno-miR-129-5p的作用靶点。

• 单位
  基础医学院; 首都医科大学