芒果MiFTs基因家族克隆及其酵母双杂诱饵载体的构建

作者：樊琰; 罗聪; 王逸涵; 余海霞; 莫啸; 范志毅; 何新华^*

来源：分子植物育种, 2020, 18(10): 3232-3239.

DOI：10.13271/j.mpb.018.003232

• 芒果(Mangifera indica L.)
• 基因克隆
• Flowering Locus T
• 载体构建

成花诱导是开花植物生长发育过程中最为重要的一环,而开花整合因子Flowering Locus T (FT)在这一过程中起非常重要的调控作用。目前,FT基因调控芒果成花的作用机制尚不清楚。本研究以‘四季蜜芒’为材料,克隆验证了从转录组测序数据中挖掘获得的3个FT同源基因,命名为MiFT1、MiFT2和MiFT3。生物信息学分析显示,3个MiFTs基因编码区长度分别为588 bp、540 bp和516 bp,分别编码氨基酸196个、180个和172个,分子量分别为48.97 kD、44.71 kD和42.27 kD,等电点分别为4.99、5.06和5.06,3个基因均含有一个保守的PEBP结构域。将MiFT1、MiFT2和MiFT3基因定向克隆到酵母表达载体pGBKT7上,通过菌落PCR和测序进行验证,并成功转化酵母菌株Y2H Gold感受态细胞。对诱饵质粒酵母菌进行自激活和毒性检测,发现pGBKT7-MiFT1、pGBKT7-Mi FT2和pGBKT7-MiFT3在酵母菌种均不具备自激活性和毒性。此酵母诱饵蛋白表达载体被成功构建,为后续蛋白互作筛选提供参考。

• 单位
  亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室; 广西大学