miR-181-5p靶向PTEN/AKT/mTOR通路对氧化应激诱导下人皮肤成纤维细胞自噬及老化的影响

作者：黄燕; 杨艳清; 万睿; 周进飞; 胡梦

来源：中国老年学杂志, 2023, 43(18): 4538-4542.

• 氧化应激
• miR-181-5p
• 10号染色体上缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)/蛋白激酶B(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路
• 自噬

目的 探讨miR-181-5p靶向10号染色体上缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)/蛋白激酶B(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路对氧化应激诱导下人皮肤成纤维(HDF)细胞自噬及老化的影响。方法 以HDF细胞为研究对象，利用不同浓度H2O2(0、100、200、500μmol/L)处理细胞，通过CCK-8法检测细胞存活率，确定构建细胞老化模型的适宜H2O2浓度，并将该浓度H2O2诱导的HDF细胞命名为H2O2模型细胞；双荧光素酶报告基因实验验证miR-181-5p与PTEN的靶向关系；利用Lipofectamine2000试剂盒对H2O2模型细胞进行转染，细胞分组为：空白组(细胞未转染)、miR-181-5p mimics组、miR-NC组、anti-miR-181-5p组、anti-miR-NC组；荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测细胞中miR-181-5p表达水平；Western印迹检测细胞中PTEN/AKT/mTOR通路相关蛋白、自噬相关蛋白(Beclin)-1、微管相关蛋白轻链(LC)3Ⅱ/Ⅰ表达水平；β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)试剂盒观察各组细胞形态及SA-β-gal染色阳性比例。结果 随着H2O2浓度的升高，HDF细胞存活率逐渐降低，有统计学差异(P<0.05),H2O2浓度为200μmol/L时，细胞存活率为51.64%,所以选择200μmol/L H2O2作为适宜诱导浓度；与HDF细胞相比，H2O2模型细胞中miR-181-5p、磷酸化(p)-AKT、p-mTOR蛋白表达明显上调，PTEN蛋白表达明显下调(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验证实PTEN和miR-181-5p存在靶向关系；与空白组和miR-NC组比较，miR-181-5p mimics组中miR-181-5p、p-AKT、p-mTOR蛋白表达明显上调，PTEN、Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达明显下调(P<0.05),细胞排列不规则、变大，轮廓不清楚，折光性差等老化状态更加明显，SA-β-gal染色阳性率显著升高(P<0.05);与空白组和anti-miR-NC组比较，anti-miR-181-5p组中miR-181-5p、p-AKT、p-mTOR蛋白表达明显下调，PTEN、Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达明显上调(P<0.05),大多数细胞呈长梭形，轮廓清晰，折光性好，且SA-β-gal染色阳性率显著降低(P<0.05)。结论 抑制miR-181-5p可能通过靶向上调PTEN蛋白表达，抑制AKT/mTOR通路，促进细胞自噬，进而延缓氧化应激诱导下HDF细胞老化。

• 单位
  武汉市第三医院