骨肉瘤细胞热休克蛋白70基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

作者：**辉; 刘玉侠; 陈军; 张新; 江露

来源：中国实验诊断学, 2005, (05): 70-73.

• 人骨肉瘤细胞
• 热休克蛋白70
• 克隆
• 基因表达 heat-shock protein 70
• gene cloning
• prokaryotic expression

目的从人的骨肉瘤细胞中钓取热休克蛋白70(HSP70)基因并在大肠杆菌中表达出热休克蛋白,为进行热休克蛋白的功能试验提供抗原。方法热休克人骨肉瘤细胞后,采用One-Step,RT-PCR方法从人骨肉瘤细胞中钓取HSP70基因,DNA测序正确的HSP70基因和表达载体pET28a连接后,构建成功了重组表达质粒pET28a-HSP70,并转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,用IPTG诱导蛋白表达后,进行SDS-PAGE及Westernblot鉴定。结果人骨肉瘤细胞HSP70基因的PCR产物约为1.9 kb,DNA序列测定结果证实,所获目的序列与文献报道的基本一致,仅有两个碱基的差异。构建的重...

• 单位
  吉林大学; 吉林省肿瘤医院; 基础医学院; 吉林大学第一医院